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▇爱丽仕（广州）化妆品研测中心有限公司阮佩怡 大家晚上好，欢迎大家来到直播室。第一次以这样的方式和业界的朋友交流，坦白地说真的有点不习惯，如果有失态之处，请大家多多包涵。今天晚上我想和大家分享的是“解读防晒效果的测试方法”。 通常对测试方法的解读应该由权威机构进行，可能在座的，不是所有朋友都对了解IEC，所以在进入主题之前，请允许我用一分钟的时间来介绍一下IEC。 IEC是以IEC法国为首的组合一起的八家临床测试机构，我们看到下图显示。IEC的测试机构分布在欧洲、南非还有亚洲，在亚洲一共是有四个分支机构。年的时候，IEC法国就是FDA许可并指定的可以进行SPF测试的十六家测试机构之一。 IECChina是年的时候成立的，成立之后我们一直都有做防晒测试。 化妆品圈内的朋友都知道，防晒产品在化妆品里面是属于一个比较特殊的产品，它的特殊之处在于：在中国是属于特殊化妆产品，要取得特殊备案才可生产销售，在美国则是作为一个OTC产品来处理的。 因为有这些特殊要求，那么问题也来了，有些什么问题呢？我们通常听到比较多的一些议论就是这个方法是源于欧美，可能不是太适合亚洲人，也有一些说法是，在国外拿到的一些测试产品，它的标识值是比较高的，但是拿到国内来测的时候，得到的值是比较低的，因此也会怀疑是不是高SPF值的产品在中国是测不出来的。也有客户反应同一个产品，为什么在不同的实验室测出来的结果会差异那么大呢？或者即使在同一个实验，两次送检的结果也会有很大差异？所有的这些疑问都归结到对测试方法的质疑。 要回答这些问题，让我们先看一下，测试防晒效果有哪些不同的方法。 一般我们所说的测试防晒效果，实际上是有两层意思。一个是以SPF值来表示的，实际上表示的是防晒伤的一个效果，另外一个是以PA表示防晒黑的效果。在方法上也是有两种，一种是体外法，另一种就是人体法。今天我们主要分享的是以人体法测试SPF值的方法。 首先，我们来了解一下人体测试方法是怎么一个过程？今天，我们会以中国的版的《化妆品卫生技术规范》作为蓝本来分享。 我把人体测试法从人、机、物、法、环五个方面做了一个归纳总结。 首先就说人，人有两个方面，一个是指受试者，另一个是指操作实验的技术员。这里的实验方法都是在化妆品卫生技术规范上的，我相信这些文字，大家都是能够看得懂的。我就根据我们日常的经验，把我们认为比较重要的，有可能会导致测试结果有偏差的部分用红色标出来做一个解读，比如这里所说的，纳入的受试者是不应该有光感性疾病，近期内未使用影响光感性的药物。那这里所说的近期应该是多长时间呢？还有影响光感性的药物，一般我们的受试者不是医生，所以这个你问他，他可能也不懂，所以这里就要求我们的技术人员要有这方面的知识。除了这个药物以外，实际上，我们在实践中也发现，一些食物也是会对防晒测试的结果有影响。比如说番茄、胡萝卜，因其中含有丰富的胡萝卜素，而胡萝卜素是色素，长期大量食用，有可能导致胡萝卜素沉积在皮肤，影响结果的判断。所以对于一些特别偏好于吃这些食物的受试者，就不太适合纳入测试，这些情况也是应该考虑的因素。 还有这里提到的皮肤类型为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，容易出现晒伤而不容易出现色素沉着者。首先我们就要很清楚皮肤的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型是怎么定义的？那怎么才叫做是容易出现晒伤而不容易出色素？这一点我们在后面是有讨论的。 那么还有孕妇及哺乳期的妇女是不应该作为受试者的，这里涉及到伦理，还有一些是吃了抗炎药的，有可能会影响到你看不到结果。那么这些我们在后面都会有讨论。 除了受试者，另一个人的因素就是操作实验的技术人员。在这个实验里面，可以说技术员的操作资质是非常重要的。我们这里所说的资质并不是说他的学历背景，我们更加看重的是他对这个方法的理解以及操作的熟练程度和准确度。 因为技术员是贯穿整个测试过程的，从上面提到的的受试者的纳入环节，他应该具备一定的药物知识以及对皮肤性状的观察外，第二个重要的环节就是产品的涂抹，这个涂抹看起来很简单，但实际上对测试的结果有很大的影响。 接下来还有的就是光照的过程中有很多细节需要注意，最后就是读数的环节。读数也是由技术员去读的，这个读数是由经过培训的以及考核合格的技术员当任的。像我们IECChina也有五六个技术员，但并不是所有的技术员都能够胜任防晒测试的工作，原因就是有些技术他没有掌握好。 刚才提到的是人的影响因素，下面我们讲一下机器的影响因素。 我们看到下面这张图，左边是（仪器）的光源，它是氙弧灯，右边是一个光学的过滤系统的内部构造，可以看到中间部分是放灯的，周围是有一圈的球面镜，球面镜的作用是把光源的能量能够最大限度地利用，它的下面就是六组分光棱镜和滤光片，可以把日光过滤变成是UVA或者是UVA+B。 图上列明了对光源的要求，“紫外日光模拟器应发射连续光谱”，那么怎么判断输出的光谱符合要求呢？我们看一下这张图。左边是一个全波长的输出图，我们看到UVA和UVB是在nm到nm区域里，再过去就是可见光。我们看一下右边的两张图，这两张图就是光谱输出图，在紫外波长的这一段，我们的要求是“没有间隙或波峰”，所以在紫外波长这一段，它应该是平滑的，没有间隙的，小于nm的区域应尽量接近零。上面的那张图，大家看到它是非常非常低，接近10的负5次方，下面这张图，就稍微有一点高，我们可以看到在左边的一点点的地方，是有一点点的波峰和间隙的。也就是说上图是比较理想的光源输出。 除了说光谱的形状，实际上在量化上面，方法也是有要求的。要求相对累计性红斑效应%RCEE，在到nm波段范围内应该达到85%至90%，这个是通过仪器测量出来的。 我们看一下下面这张图，我们的仪器是送到瑞士的一个仪器校正公司，去做校正的结果。可以看到右边上面的图中，表示六个通道的输出都是比较均匀的，然后下面那张图是在非紫外区能够屏蔽得非常好。 刚才我们说的就是人和机器的一些影响，那么下面，我们讲一下人、机、物、法、环里面的物。物主要是指两个方面，一个是指测试产品，另外一个是标准品。而测试产品和标准品的涂抹都是有一定要求的。 刚才我们也讲到了技术员的重要性，其中一个就是产品涂抹的重要性了。在中国的化妆品卫生技术规范里面要求是不小于30cm2，意思是可以大于这个值，在我们的经验看来，稍微大一点的面积，涂抹均匀性会好一点。还有的就是产品的涂抹量和涂抹方法。化妆品卫生技术规范写的是推荐使用乳胶指套将样品均匀涂抹于试验区内，也就是说可以用也可以不用，对于一些比较难以涂抹均匀的、粘性比较强以及粉性产品也是可以直接用手指来涂抹的。 这里也提到的就是标准品的选择，我们可以看到P2还有P3比较通用，一般来说，我们都是选用P2。 刚才说了那么多，都是方法实施的必备条件。现在，我们就讲一下测试方法。 首先，受试者是需要俯卧在床上的，然后我们需要做三个MED，其中有一个不是不涂产品的，我们叫做空白MED，另一个就是所测产品的MED，还有就是用来做对照的标准品的MED。这里还有一点需要注意的是，在做光照的时候，照射剂量梯度的选择，在中国化妆品卫生技术规范里面，是有一个分界点的，这个分界点就是SPF值为25。那么小于或等于25，可以选择大一点的照射剂量，可以选择是25%。SPF值大于25，照射剂量不超过12%，也就是说你最多只能用12%，当然你可以用低于12%的，但一般来说，越低操作就越难了。最后结果是怎么算的呢？或者是有没有一些异常的结果是需要除掉的呢？ 这里的排除标准有几点：一是所有的测试点都没有红斑，二是所有的测试点都有红斑，最后还有一个情况就是红斑出现得非常随机，没有逻辑性。 对于结果得计算，我想是比较简单的，大家基本也是能够看得懂的。那么就是说对于有效结果，要求是最少是十个有效数据。但为什这里可以说是最多可以测到25例，然后最多的有效数据是20例呢？ 这意思就是说，因为这个产品是要符合统计学的要求，这个要求就是指均数的95%的可信区间不超过均数的17%。虽然要求是最低要有十个有效数据，但为了符合统计学的要求，基本上都会做超过10个受试者的。 刚才我们有提到有几种情况的数据是不能用的，那么结果最后是怎么看，哪些是属于不正常的。这里有四张图，说明一下，我们用的是ISO的六点法，第一张图写的正常的，正常的意思就是说，我们可以看到第一个通道是没有任何红斑的，其余的五个红斑，可以明显地看到由低到高的一个递增规律。第二张是全部没有红斑，这样的结果是要剔除掉的。那么随机出现是什么意思呢？就是我们所看到的左下角的那张图，红斑出现的位置是不符合逻辑的，它最高的位置有，最低的位置也有，然后中间有一些区又没有。这种情况的出现，可能是在操作过程中有失误，如产品涂抹不均匀或者光照的剂量没有调整好。最后一张就是全部有红斑，为什会出现这种情况呢？除了操作过程中产品涂抹不均匀，或者剂量没有调整好，也有可能是预测产品，我们给出的预测值太高了，但实际上它的实际值比较低，所以就导致了六个区域出现了红斑，这种情况是最不希望看见的，因为这对受试者也是一个伤害。 这里有一个表归纳总结了测试的流程，我们可以看到主要的过程，一是：受试者的纳入，二是：预测一下受试者的MED，然后就是要确定这个MED。 后面的两天就是产品的测试，先把背部划区域，然后涂抹产品，在测试区域进行光照，最后是结果的观察。测试者最少要来三次，有时候要来四次，如果他是来三次，那么他需要连续来三次。前面第一、第二次是需要连续的，后面的两次也是要连续来的。所以有时候一些客户问我们，做一个防晒测试需要多长时间，这个时间是需要估计得长一点的，因为也要考虑到受试者的时间安排。 前面我们聊到测试方法中牵涉到的人员、仪器、使用到的一些物品以及测试方法的一些过程，下面我们看一下测试对环境的一些要求。在中国的化妆品规范里面是没有一些特别的要求的，没有温度、湿度、房间大小、房间的光线的强度这些都没有太大的要求，但是这些因素对判断结果有没有影响呢？我们后面会讨论到。 讲到影响测试结果的一些因素，之前我们是从人、机、物、法、环这几个方面阐述这个方法，那么现在也从这几个方面去看一些有哪些影响因素。刚才我们谈到受试者纳入的指标，其中一个就是Phototype的要求，那么Phototype的定义是怎么来的呢？它是叫FitzpatrickskinPhototype。它的定义是指人在经过没有光照的冬天以后，不使用任何防护，光照30到45分钟后，根据出现的症状，来判断Phototype。 SPF要求的就是Phototype的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，接下来就看一下Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的定义是怎样的。PhototypeⅠ就是很容易晒伤，从来不晒黑的，那么这个是非常难的，即使在白种人里面也是极少的，PhototypeⅡ就是很容易晒伤，有轻微的晒黑，PhototypeⅢ就是中度的晒伤，然后是逐渐的晒黑。 一般来说亚洲人比较多的是PhototypeⅢ，PhototypeⅡ也有，PhototypeⅠ是否有呢，我本人没有见过，但是，我听新加坡的同事说，他们会有，但是也是非常非常的少。根据上面的定义，我们可以看到这是一个由受试者去表述的一个回答，带有非常大的主观，而且很坦白地说，刚过完一个冬天，谁能想得起在30到45分钟的时候是怎么样的呢。所以这个表述不是很客观，为了更加客观地把这些知识应用到这个测试中，就有了ITA这么一个定义。 这个ITA实际上是一个源于L*,a*，b*色空间理论，我们经过数据的积累，发现ITA的大小是跟肤色的深浅有一定关系的，ITA值越大，肤色应该是越浅。 下面这张图，在中度的时候ITA是28到41之间，小于28是比较偏黑的，所以对SPF值测试来说，因为我们的观察终点是皮肤有没有红斑，如果是肤色偏黑的话，终点就不容易观察。所以我们要求ITA要大于28。 之前我们也是提到过人种也是会对测试结果有影响，IEC法国和IEC新加坡在年的时候专门做了这样一个研究，下面给大家看一张图。在这个研究中我们可以看到一共是选了两种标准品，一种是FDA的标准品，另一种是COLIPA的标准品，当时还没有ISO六点法。 也选了三种不同SPF值的样品，当时SPF值都是偏低的，30已经算是高的。我们可以看到低SPF值产品的在各种人种的结果上基本是没有差异的。我们可以看到在统计学上，SPF值超过15的产品会有一点差异，但实际上这个偏差比较小，这个偏差在平常的运用中是否有影响？下面会对其进行讨论。 在讨论之前，先介绍一家叫BIPEA的非营利性组织，它成立于年。致力于实验室的能力测试，也就是水平测试，然后是评估实验室结果的准确性，它的测试项目里面就包括防晒产品的测试。我们是从年开始参加这个测试。从下面这张图里，参加BIPEA水平测试的实验室比较多的是欧洲，然后在亚洲是年才开始有，我们也是年开始，那么到目前为止，我们是中国唯一一家参加BIPEA能力测试的研究机构。 在这里向大家展示一下，我们从年开始到年3月份的测试结果，表的第二列是不同质地的测试产品，第三列是测试产品标签上注明的SPF期望值，第四列是多个实验室测出来的结果的均值以及分析认为可接受的范围，最后一列是我们测出来的数据。大家可以看到我们测出来的数据都在这个范围里面，有些时候还是在中值的范围里。 下面这张图表，圈起来的那两行是年3月结束的一个测试结果，我觉得特别有意思。我们测了两个产品，一个是日常防晒产品，另一个是针对敏感肌肤的一个啫喱状护肤品，我们收到的产品的期望值是大于或等于45。不过最后测出来的结果真的是吓了一跳，非常高。第一个产品均值是88，范围是47.5到.8,我们测出来的是96.4； 第二个产品的均值是.2，范围是36.3到.1，我们测出来的是.7。在这里要说明的是，其实这两个产品我们都没有测到十个有效数据，因为在我们签订的合同里有说明，SPF指超过80，我们就不测了。所以这两个产品，实际上只得到3到5个有效数据，因为前面好些数据都没有结果。 通过上面的两张图，大概也可以说明一下，实验室里面亚洲的并不多，中国的就只有一个，大部分的都是欧洲。那欧洲人和亚洲人测出来的结果会有很大的差异吗？我们这样看下来，基本上没有很大的差异。； 另一点就是水平测试的机制是非常严谨的一个机制，完全是双盲的一个机制，从产品的接收，到最后的统计，是不会暴露实验室的名字的，整个过程中实验室都是以一个代码出现。在这种情况下，保证了数据的客观性及真实性，以及能够真正地去考察一个机构的测试水平。 下面这张图是我们.3做的一个喷雾产品，我们拿到的代码是，可以看到我们的数值刚好是在均值这一列，私下在和企业的交流中，大部分的企业都希望我们能够把数据测得越高越好，那是否是说测得越高就代表这个值越准呢？我们也可以看一下这张图，其实大部分的数据都是在35左右，确实是有两个实验室测出来的值是非常高，但明显是远远超出可接受的范围。 之前讨论的是人种的影响，其实只要你是严格按照方法来操作，那么在人种和实验室之见的差异应该是可以接受的。 接下来讨论一下MED的影响因素，首先我们先看一下防晒SPF值的判断是红斑，每一个方法的描述基本上是大同小异，从下面这张图，我们看到ISO的描述是比较严谨的，写的非常的清楚：第一个出现的有边界清晰的红斑通道看成是一个MED。 我们的观察是以发红作为一个指标，所以我们的经验看来，温度和光强对判断是有很明显的影响。光线强弱不同，所看到的结果不同，还有就是室温，如果温度过高的话，人体本身的皮肤就比较容易发红，这样就会干扰到结果的判断。 除了上面所提到的这些因素，我们还观察到产品的涂抹及光照过程的影响因素是非常多的。比如产品涂抹的均匀性怎么判断，通常我们是用伍氏灯来观察，实际上伍氏灯就是一个紫外灯，因为防晒产品含有紫外剂，就会有吸收，那么就能非常清晰地看到产品是否涂抹均匀，这是非常好的一个工具。在测试过程中，紫外光是通过不锈钢终端压到皮肤上的，而人体的皮肤是凹凸不平的，是否压得平稳准确也是非常重要的。还有就是剂量的设定，右边这张表也是我们总结出来的，不同的ITA应该用什么MED比较合适，这是一个经验值。 这里列了三种方法，分别为中国的方法、ISO方法和FDA方法的比较。其中ISO方法是被世界上大多数国家和地区所接受的，但是美国还是会以FDA的方法为主。中国的方法参考了ISO和FDA的方法。关于剂量增减的比例，ISO是两个比例，一个是25，另一个是15，美国的FDA的范围比较多，操作起来会比较困难，中国的方法要求的五点法，ISO和FDA方法是至少五点，也就是说可以六点。 这里还有很不相同的一点，中国化妆品规范里面对实验室的条件是没有要求的，但是在ISO方法是有要求的，室温是要求在18到26度，光照强度和美国的FDA方法是一样的，至少是lux。还有一点就是统计学上面的不同，中国和ISO方法是一样的，要求的是均值的95%的可信区间应该小于均值的17%，但是美国方法标识的是范围，是等于均值减去A值，A是通过数据统计出来的值。所以如果大家在美国买到一个SPF值标识为50的产品和在欧洲买到的同样SPF值的产品，实际的意义是不同的。 下面这张图对比了三种方法的差异，因为三种方法的剂量不一样，测量的范围也不一样，对最后的结果也是会有一点影响到。 下面简单地说一下防晒方法的拓展，除了规范上面写的SPF值、抗水性、UVA，这里就是给大家一个思路，抗水性大家可能都听说过，那么还有抗沙性，就是验证涂抹防晒产品之后，在沙滩上是否还能发挥出效果，还有持久性和筛选性测试，对于筛选性测试，我们建议一些研发机构在产品研发过程中，如果不确定产品的防晒值，可以进行筛选性测试，虽然筛选性测试的结果不需要符合统计学数据，但实际上结果还是可靠的。 最后我们说一下伦理问题，实际上做临床测试，都是需要通过伦理批准的，伦理是指我们要尊重受试者的意愿，不能伤害受试者，要尽最大的努力去保护受试者。因为防晒测试的特殊性，也有一定的风险，所以我们要更加充分地去考虑受试者的权益。那么IECChina是国内是首家投保了职业责任险的一家CRO。 关于防晒测试方法今天就和大家分享到这里，如果大家有什么问题想讨论的，欢迎大家提问。 最后想借用这个平台发布一个信息。我们和华代生物准备在11月19到22号在广州举办一场体外科学与临床研究学术研讨会及专题研修班，我们这个研讨会和研修班是专门针对技术范畴的。我们这次的主题主要是安全性方面的问题，从体外测试到人体测试，对安全性要怎么控制，我们会有很多的数据和大家一起分享。而且我们请来了欧美韩一些非常有理论和实战经验的专家。欢迎有兴趣的朋友报名参加。 提问环节 问：阮老师，红斑无序的情况影响因素除了涂抹不均和光照剂量之外，还可能有其它影响因素吗？因为有时做实验时会发现某个产品会很容易出现无序的情况，想知道有没有可能和产品本身有关系？ 答：除了操作过程中，比如涂抹不均匀，剂量的输出是否稳定，跟产品也是有关系，比如说现在很多的高SPF值的产品，通常都是物理防晒剂和化学防晒剂一起复配，物理防晒剂最大的问题就是分散性，如果分散性不好，在涂抹过程确实是难以涂抹均匀的。 问：请问老师，受试者测试结束后，你们对造成的红斑有没有什么处理措施？假如有，是怎么修复的？ 答：其实一般情况下，红斑不会对受试者造成很大的伤害，它只是表皮的红斑，所以一般也不需要特别的修复措施，如果你选用了过大的剂量，造成比较严重的伤害，这当然是需要修复的，这需要由皮肤科医生对症给一些外用的药物。 问：請問噴霧包括推進劑產品的計重是整罐減重法嗎？極稀產品塗布流淌問題怎麼解決?謝謝 答：因为推进剂不含有防晒剂，所以我们还是会以防晒剂本身的重量来计算。极稀的产品容易流淌，因为产品的量其实是很少的，一般来说是80mg，我们是用40cm2来测试的。坦白说，我们还有碰到稀到不能涂抹的问题，如果有兴趣的话，你可以把产品拿到我们这里共同探讨一下。 问：请问阮老师，你们出具的防晒测试报告在中国是否认可呢？ 答：如果你的报告是用来拿证的，抱歉，我们不是指定的机构，如果你是想了解研发过程中产品的真实情况，对你的研发起到指导作用，这个是可以用的，还有我们出具的是英文报告，在国外是可以用的。 问：那么请问一般这样的测试收费标准怎么样呢？ 答：关于收费，我们是要看产品的SPF值的多少来定的。 问：超过一定人数25人，是不是这次结果就完全作废了 答：如果你的测试人数超过25人，这次测试结果是完全作废的。 问：刚刚提到uv防水性的测试，我想问一下对用于测试的水有什么要求吗？ 答：水的温度我们是有要求的，对于水的流速，各个方法都没有特别的要求，这个需要靠经验去摸索。 问：为什么有时候相同的配方，测出来的值会不一样啊？ 答：因为这是个人体测试，而人体的差异性是千变万化的，所以它会有一个要求，只要是不超出统计范围都是可以接受的。 问：请问建立一个uv测试实验室的成本大概要多少呢？ 答：第一次的投入不是很大，可能是几十万，但维护费很高昂的，我们是按照ISO的要求，十八个月进行一次送检，而且都要送到国外的校正机构。 问：有哪些体外测试法和人体法关联性比较好的吗？ 答：如果说体外法能够完全代替人体法，那就不需要人体法了，因为这个人体法风险那么大。基本上还没有哪种方法的关联性比较好，如果说关联性比较好的话，对于低SPF值的可能会好一些，但是对于高SPF值的产品来说，这种关联性都不太好。关于这个问题，还可以补充一下。在07版化妆品卫生规范还没有出来的时候，也就是还没有人体测试法的时候，SPF值是以体外法测试的，那么后来为什么会引进人体测试法呢？是因为人体法也是我们一些专家在跟国际接轨之后，发现用体外法做出来有效果的产品，在人体上面并没有表现出防晒效果，后来我们都是使用人体法结果来作为产品标识的依据。 问：请问阮老师，那个抗沙性测试大致是一个怎么样的思路呢？ 答：主要是涂抹完产品后，用沙子在上面做一个有规律的冲洗，然后再去测它的SPF值。 问：人擦脸上的防晒品，厚度与测试单位面积的厚度一样吗？ 答：肯定不一样，因为每平方厘米涂2mg是蛮厚的。比如在巴西，他们也是阳光比较充裕的一个国家，他们的规范是SPF值至少是30以上的。 问：请问刚才提到的喷雾产品应该按去除推进剂计算，那么在实验的过程中会与一般产品有什么不同吗？ 答：我们在BIPEA的测试产品里面，也是有这种喷雾产品，这种喷雾是不含推进剂的，只是含防晒剂。 问：请问阮老师，你们IEC跟其他检测机构有什么不同吗？ 答：我们是专业做化妆品人体测试的，是属于独立第三方的临床机构。 问：请问加多了防晒剂，就代表SPF会高吗？ 答：理论上应该是的，SPF值是防晒效果的体现，但是不是加多了就体现这么一个效果呢？我觉得是不一定的，第一：要防晒剂能够体现出这么防晒效果，首先在你的生产、储存、运输过程中都要注意。比如说你是添加了很多的物理防晒剂，但是它分散性不好，那么它是不能起到一个防晒效果的，所以还是要实测才能知道它的效果是怎么样的。 希望能够回答到大家的问题，谢谢大家！晚安！ 千色课堂，今晚8点又开新课啦 沈工与严工强强联手值得期待，千色课堂不见不散喔 赞赏 |
